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Roche與英諾磁珠相結合的方法與Genmagbio、acon、圣湘試劑盒比較
發布時間:2013-01-09 最后編輯時間2013-01-09 瀏覽次數:1893次 來源:英諾生物



1. Roche
與英諾磁珠相結合的方法與Genmagbioacon、圣湘試劑盒比較

1.1 樣本

≈107IU/mL HBV的陽性血清

≈103 IU/mL HBV的陽性血清

≈106 IU/mL HBV質粒的小牛血清(自己配制)

1.2 試劑

Roche柱子提核酸試劑盒

Roche柱子提核酸試劑+英諾磁珠

Genmagbio磁珠提核酸試劑盒

圣湘磁珠提核酸試劑盒

acon提核酸試劑盒

1.3 方法

    1.3方法

1.4 PCR組份及條件

1.4 PCR組份及條件

1.5 結果



No.

Colour

Name

Type

Ct

Given Conc (IU/ml)

Calc Conc (IU/ml)

% Var

Conc (IU/ml)

1

     

s7

Standard

25.59

1.330E+06

1.190E+06

10.5%

 

2

     

s6

Standard

28.89

1.480E+05

1.889E+05

27.6%

 

3

     

s5

Standard

32.85

2.370E+04

2.075E+04

12.5%

 

4

     

s4

Unknown

35.95

 

3.692E+03

 

 

5

     

s0

Unknown

36.21

 

3.199E+03

 

 

6

     

roche 7

Unknown

 

 

 

 

4.7E+07

7

     

roche+2mg YN 7

Unknown

18.89

 

4.995E+07

 

8

     

roche+1mg YN 7

Unknown

17.34

 

1.190E+08

 

9

     

roche+0.5mg YN 7

Unknown

18.59

 

5.927E+07

 

10

     

genmegbio 7

Unknown

17.77

 

9.353E+07

 

11

     

圣湘 7

Unknown

16.36

 

2.054E+08

 

12

     

acon 7

Unknown

23.97

 

2.945E+06

 

13

     

roche 3

Unknown

 

 

 

 

3.1E+03

14

     

roche+2mg YN 3

Unknown

34.14

 

1.011E+04

 

15

     

roche+1mg YN 3

Unknown

35.38

 

5.074E+03

 

16

     

roche+0.5mg YN 3

Unknown

33.65

 

1.329E+04

 

17

     

genmegbio 3

Unknown

31.80

 

3.734E+04

 

18

     

圣湘 3

Unknown

30.24

 

8.937E+04

 

19

     

acon 3

Unknown

 

 

 

 

20

     

roche plasmid 6

Unknown

 

 

 

 

1.330E+06

21

     

roche+2mg YN plasmid 6

Unknown

23.22

 

4.469E+06

 

22

     

roche+1mg YN plasmid 6

Unknown

23.30

 

4.269E+06

 

23

     

roche+0.5mg YN plasmid 6

Unknown

22.74

 

5.839E+06

 

24

     

genmegbio plasmid 6

Unknown

23.94

 

2.994E+06

 

25

     

圣湘 plasmid 6

Unknown

21.83

 

9.690E+06

 

26

     

acon plasmid 6

Unknown

25.15

 

1.527E+06

 

其中:Roche     18    (相當于一個PCR反應中加入了8μL血清中的核酸)

roche+YN  18

genmegbio  18

acon       11

圣湘       18020 μL體系)

1-4號為自己的標準品,5號為陰性對照,6-25號為用不同的試劑盒提取的核酸。

1.6 結論

PCR結果可以看出,圣湘測定的模板濃度值最高,其加入的血清核酸最多,所以測出的值比其他試劑盒偏高;acon測定的模板濃度值最低,其加入的血清核酸量低有關;Roche柱子提取由于操作問題沒有提出核酸;Genmagbio試劑盒與Roche和英諾(1mg)相結合的方法測定的模板濃度值相當。

 

利用Roche與英諾磁珠相結合的方法重復提取陽性血清10

2 樣本

≈107 IU/mL HBV的陽性血清

2.1 試劑與方法

Roche試劑+英諾磁珠(1mg),重復提取10

2.2 PCR組份及條件

PCR組份:

組份

Template

10×PCR buf.

Mg2+

引物

dNTP

探針

H2O

體系(μL

2

2

1.6

1.6

1.6

0.4

0.2

10.6

濃度

 

 

4mM

0.4μM

0.2 mM

0.2μM

1U

 

注:20μL反應體系

PCR條件:

Cycle

Cycle Point

Hold @ 95°c, 5 min 0 secs

 

Cycling (40 repeats)

Step 1 @ 95°c, hold 10 secs

 

Step 2 @ 60°c, hold 45 secs, acquiring to Cycling A([Yellow][2][2])

3. 結果


 

No.

Colour

Name

Type

Ct

Given Conc (Copies)

Calc Conc (Copies)

% Var

1

     

1

Unknown

22.61

 

 

 

2

     

2

Unknown

19.31

 

 

 

3

     

3

Unknown

20.42

 

 

 

4

     

4

Unknown

19.70

 

 

 

5

     

5

Unknown

18.53

 

 

 

6

     

6

Unknown

19.30

 

 

 

7

     

7

Unknown

20.27

 

 

 

8

     

8

Unknown

19.63

 

 

 

9

     

9

Unknown

21.22

 

 

 

10

     

10

Unknown

18.78

 

 

 

11

     

陰性

Unknown

 

 

 

 

4. 結論

總結:目前roche配方+英諾磁珠的提取方法基本與市面同類產品提取效率相近。


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