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羧基磁性微球表面生物分子嫁接方案
發布時間:2013-01-17 最后編輯時間2013-01-17 瀏覽次數:6486次 來源:英諾生物

 

羧基磁球表面生物分子嫁接方案


        鄭州英諾生物科技有限公司為您提供最專業的羧基磁球表面生物分子嫁接方案如下:

1. 用EDC和NHS活化

        搖勻磁球后,從小瓶中移取一定體積(比如500μL)含有羧酸基團的磁珠,用等體積的去離子水和濃度為50 mM、pH值為6的MES各洗兩次;

        把EDC溶解在冷卻的50 mM、pH值為6的MES溶液中配制成100 mg/mL的溶液;

        同樣地,于冷卻的50 mM、pH值為6的MES溶液中配制100 mg/mL的NHS溶液;

        加200μL EDC溶液和200μL NHS溶液到洗過的磁珠溶液中,充分混合,并在室溫條件下震蕩30min;

        震蕩結束后,磁分離3-4min并除去清液,用500μL 濃度為50 mM、pH值為6的MES洗兩次,洗完后的磁珠已經被活化,分散在緩沖液中,可以用于含氨基基團的配體的鍵合。
 
2. 活化后配體的固定

(1) 加入適量(0.01-0.5mg)配體到大約200μL濃度為50 mM、pH值為6的MES緩沖液中,然后把此溶液加到活化的磁珠溶液中;

(2) 如需要再補加一定量濃度為50 mM、pH值為6的MES到上述溶液中,使最終體積為500μL,確保混合均勻;

(3) 在室溫條件下至少震蕩1h或在4℃ 條件下震蕩3h;

(4).震蕩結束后,磁分離3-4min并除去清液;

(5) 按下述步驟封閉和清洗鍵合的磁珠。

3. 屏蔽未反應的表面

        為了除去未起作用的活化羧酸基團,含有配體且鍵合過的磁珠在室溫條件下,要么用濃度為50mM,pH值為7.4的Tris震蕩15min,要么用濃度為50mM的乙醇胺的磷酸鹽緩沖液(pH 8.5)震蕩 60min;

        涂覆過的磁珠需要用500μL 的PBS溶液或者50mM的Tris 洗三次,溶液中可以加入0.1 - 0.5 %的BSA或者脫脂奶粉做封閉液封閉一些活性位點。

        涂覆過的磁珠重新懸浮于所需濃度的 PBS緩沖液或Tris儲存液中,在2 - 8℃條件下儲存備用。 涂覆的磁珠在2 - 8℃時如果固定配體非常穩定,通常可以儲存幾個月,還可以加入0.02%(w/v)疊氮化鈉(NaN3)作為抑菌劑。

 磁性微球用于細胞分離


 

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